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【導讀】作為微孔板比色計的酶標儀，其基本功能不外乎一個比色測定，所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件

    作為微孔板比色計的酶標儀，其基本功能不外乎一個比色測定，所不同的是在測定波長范圍、吸光度范圍、光學系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異，當然全自動酶免疫分析系統還具有自動洗板、溫育、加樣等功能。在臨床實驗室實際工作中，實驗人員在使用酶標儀進行測定操作時，有時難免會對酶標儀的一些性能指標產生迷惑，甚至對酶標儀的應用產生錯誤的理解。如諸如使用酶標儀較用肉眼觀察測定的陽性率明顯增加這樣的問題。

    一、測定波長目前國內常見的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下，經HRP作用，分別氧化為2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和聯苯醌。當pH值為5.0左右時，DAB在450nm波長處有最大吸收，當pH值降為L0時，最大吸收波長移至492nm,同時摩爾消光系數變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產物聯苯醌在波長450nm處有最大消光系數，如果HRP量少，H:O:和TMB過量時，則形成藍色的陽離子根。降低pH,即可使藍色的陽離子根轉變為黃色的聯苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產物穩定90min.因此，450nm和492nm兩個波長是目前ELISA測定最常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件，可以同時安裝6~8片濾光片，所配備的濾光片均應包括上述兩個波長，有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大一般酶標儀的測定波長在400~750nm或800nm之間，完全可以滿足ELISA的顯色測定。。除了這兩個基本濾光片外，考慮到雙波長比色的需要，還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長的濾光片，其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時，有的實驗室希望用酶標儀作微量生化測定，故酶標儀生產廠家對其生產的酶標儀擴展了紫外檢測功能，此時需要一個340nm波長濾光片。此時，酶標儀的測定波長范圍就成為340-750nm或800nm。酶標儀有單波長和雙波長檢測功能有時使用者不知在什么情況下使用單或雙波長檢測。所謂的“單波長”就是使用一種對顯色具最大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定；而“雙波長”則除了用對顯色具最大吸收的波長即450nm或492nm進行比色測定外，同時用對特異顯色不敏感的波長如630nm進行測定，酶標儀最后打印出來的吸光度則為二者之差。630nm波長下得到的吸光度是非特異的，來自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，最好使用雙波長，且不必設空白孔。

    二、測定的吸光度范圍通常，酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間，但現在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線性。如Labsystems公司DragonWellscanMK-2的吸光度測定范圍為0-3.5，而MultiskanAscent的吸光度測定范圍(Abs)達0-4.0，在0-4.0范圍，線性誤差不超過±2.0%，在0.3-3.0吸光度范圍內，測定精密度CV小于±0.2%；3.0-4.0Abs范圍內，測定精密度CV小于士0.2%。因此，對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。

    三、光學系統酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個參比通道，每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何，均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現出來。光學系統好的話，則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

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【導讀】適用： 利用酶聯免疫吸附測定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。 檢測原理： 酶聯免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定。先將三聚氰胺酶

適用：

利用酶聯免疫吸附測定法用于食品及飼料中三聚氰胺的定量測定。

檢測原理：

酶聯免疫吸附測定法定量測定三聚氰胺殘留。利用萃取液通過均質及振蕩的方式提取樣品中的三聚氰胺進行免疫測定。先將三聚氰胺酶標記物，樣品萃取物及標準加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體，孵育30分鐘后洗掉小孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。再用去離子水清洗結束后，每孔中加入清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。孵育30分鐘后停止此反應，根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值。

設備及材料：

1、具有450nm的酶標分析儀

2、8頭或12頭洗板機(選配)

3、三聚氰胺檢測試劑盒

4、可吸取50ul的移液器及吸頭及.吸水紙

5、蒸餾水或去離子水

6、 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.

7、清洗液：0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾水定容至1000ml.+0.5ml 土溫20樣品

飼料前處理：(稀釋倍數：20)

1、稱1g飼料樣品，加入4ml甲醇；

2、震蕩1min，加入0.1g氯化鈉；

3、4000轉離心5min；

4、取上清液0.2ml加入到0.8ml 20mMPBS中，混勻。

5、取150ul測定。

檢測：

1、先將三聚氰胺酶標記物50ul，樣品150ul及標準150ul加入到已經包被有三聚氰胺抗體的微孔中開始反應。

2、在30分鐘的孵育過程中，樣品萃取物中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標記物競爭結合微孔中的三聚氰胺抗體；

3、孵育30分鐘后用清洗液洗掉小孔中所有沒有結合的三聚氰胺及三聚氰胺酶標記物。清洗四次后，放在桌上用吸水紙吸掉微孔板里多余的水份；

4、清洗結束后，每孔中加入100ul清澈的底物溶液，結合的酶標記物將無色的底物轉化為藍色的物質。

5、孵育30分鐘后加入100ul 停止液STOP停止此反應，根據各孔顏色深淺進行數據讀取。依據標準的顏色得出樣品中三聚氰胺的的濃度值

結果分析：

1、半定量的結果是由樣品的吸光率與標準的吸光率的簡單對比而來判定：樣品的顏色比標準的顏色淺，則三聚氰胺的濃度比標準樣的濃度高，樣品的顏色比標準的顏色深則三聚氰胺的濃度比標準樣的濃度低。

2、定量分析需要繪制以標準樣的吸光率為X軸,以標準樣的濃度的半對數為Y軸的曲線圖。依據標準樣。吸光率的點畫成一直線,如此樣品的光吸收率可在線上找到,與此相對應的Y軸則為樣品的濃度,樣品光吸收率。范圍應比標準樣的最底范圍高,比最高范圍低, 即可說明此樣品中三聚氰胺的含量大于500ppb或小于20ppb。

特點：

本產品為酶聯免疫吸附測定法(ELISA)法，靈敏度高、檢測成本低，可適用于生產及檢驗單位大批量快速篩查。

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　　酶標儀是用于臨床檢驗學的常見設備，廣泛用于臨床研究，生物學，農業學和食品安全監測等。中國的免疫診斷方法有三個：酶免、放免和發光。放免由于試劑污染問題和有效期問題已經被市場淘汰，正處于衰退期，而發光的設備比較昂貴，酶免正處于成長期，因此此時購買酶標儀是非常適時又正確的選擇。
　　
　　酶標儀的日常維護和保養要注意些什么呢？
　　
　　1、儀器應放置在無磁場和干擾電壓，低于40分貝的環境下；
　　
　　2、應避免陽光直射以防止設備老化；
　　
　　3、操作時環境溫度應在15℃－40℃之間，環境濕度在15％－85％之間；
　　
　　4、運行中操作電壓應保持穩定；
　　
　　5、操作環境空氣清潔，避免水汽，煙塵；
　　
　　6、保持干燥、干凈、水平的工作臺面，足夠大的操作空間；
　　
　　7、使用加液器加液，加液頭不能混用；
　　
　　8、盡量配套使用洗板機洗板，這樣洗的干凈，有效避免交叉污染；
　　
　　9、嚴格按照試劑盒的說明書操作，反應時間準確；
　　
　　10、在測量過程中，請勿碰酶標板，以防酶標板傳送時擠傷操作人員的手；
　　
　　11、請勿將樣品或試劑灑到儀器表面或內部，操作完成后請洗手；
　　
　　12、如果使用的樣品或試劑具有污染性、毒性和生物學危害，請嚴格按照試劑盒的操作說明，以防對操作人員造成損害；
　　
　　13、如果儀器接觸過污染性或傳染性物品，請進行清洗和消毒；
　　
　　14、不要在測量過程中關閉電源；
　　
　　15、對于因試劑盒問題造成的測量結果的偏差，應根據實際情況及時修改參數，以達到zui佳效果；
　　
　　16、使用后蓋好防塵罩；
　　
　　17、出現技術故障時應及時與廠家，切勿擅自拆卸酶標儀。