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液相色譜柱最初的硅酸巖原材料處理成水玻璃，進而通過溶膠-凝膠等方法制備成多孔性硅膠微球，最后在硅膠表面進行化學修飾，鍵合特定的基團，每一步都有研發人員辛勤的汗水和努力。
80年代，色譜研究人員創造性的將硅膠和有機聚合物的優勢結合，通過在硅膠表面包覆一層聚合物薄膜，使內部的硅膠基體不受影響，具有高機械強度和分析效率；同時表面的聚合物層保護顆粒在堿性條件下不會溶解（耐pH=10），阻隔硅膠中殘留的金屬及硅醇基與化合物的相互作用。進入21世紀后，研究人員又開發了“雜化顆粒技術”，用烷基橋來取代連接在堿性條件下不穩定的Si-O鍵。
從60年代di yi臺商品化的高壓液相色譜儀器的面世，液相色譜已經歷了50多年的發展歷程，在這過程中，針對小分子的分離問題，衍生了全多孔顆粒和表面多孔顆粒的技術。
 高效液相色譜儀的原理：　　分配系數與組分、流動相和固定相的熱力學性質有關，也與溫度、壓力有關。在不同的色譜分離機制中，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數，離子交換色譜法為選擇性系數（或稱交換系數），凝膠色譜法為滲透參數。但一般情況可用分配系數來表示?！　≡跅l件（流動相、固定相、溫度和壓力等）一定，樣品濃度很低時（Cs、Cm很?。r，K只取決于組分的性質，而與濃度無關。這只是理想狀態下的色譜條件，在這種條件下，得到的色譜峰為正常峰；在許多情況下，隨著濃度的增大，K減小，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質濃度增大，K也增大，這時色譜峰為前延峰。因此，只有盡可能減少進樣量，使組分在柱內濃度降低，K恒定時，才能獲得正常峰。 　　儀器使用：　　高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質。　　與試樣預處理技術相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質上十分相近的物質成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著固定相的發展，有可能在充分保持生化物質活性的條件下完成其分離?！　PLC成為解決生化分析問題Z有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。　　液相色譜-質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜聯用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類，海水中的不揮發烴類，使環境污染分析得到新的發展。 　　該儀器應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域?！　?、分離混合物：高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質?！　⊥ㄟ^與試樣預處理技術相配合，高效液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質上十分相近的物質，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發展，還可在充分保持生化物質活性的條件下完成對其的分離。　　2、生化分析：由于高效液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優點，因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域，并已成為解決生化分析問題Z有前途的方法?！　?、儀器聯用：高效液相色譜儀與結構儀器的聯用是一個重要的發展方向。高效液相色譜一質譜聯用技術受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等：高效液相色譜一紅外光譜聯用也發展很快，如在環境污染分析測定水中的烴類等．使環境污染分析得到新的發展。
【導讀】高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。與經典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度?。?um-10um）、

    高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。與經典的液相色譜相比，具有高效液相所用的固定相粒度?。?um-10um）、傳質快、柱效高的優勢。近年來，在保健食品功效成分、營養強化劑、維生素類、蛋白質的分離測定等應用廣泛。世界上約有80％的有機化合物可以用HPLC來分析測定。

    高效液相色譜的分離過程HPLC，借溶質在兩相間分配系數、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質得以分離。

    高效液相色譜儀操作步驟：

    1)過濾流動相，根據需要選擇不同的濾膜。

    2)對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

    3)打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀)，連接好流動相管道，連接檢測系統。

    4)進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。

    5)一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。

    6)調節流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。

    7)設計走樣方法。點擊file，選取selectusersandmethods，可以選取現有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊newmethod。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

    8)進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數據和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

    9)關機時，先關計算機，再關液相色譜。

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